2.2.2VD与B淋巴细胞B淋巴细胞功能紊乱对RA的发病机制也存在一定影响。

然而，在采用此种方法进行检测的过程中，所使用的盐酸奈乙二胺属于致癌物质。通过改善食品色泽来吸引更多的消费者。

在改变肉类产品色泽的同时，还能有效提升产品口感。在使用亚硝酸盐之后的肉类产品会呈现出鲜红的颜色，满足消费者的感官需求。下面简谈检验过程中重要的环节：方法的原理是试样经沉淀蛋白质，除去脂肪，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合而成紫色染料，与标准比较定量用样品的吸光度从标准曲线上查出相应的亚硝酸钠的浓度，通过公式计算样品中亚硝酸盐的含量。除此之外，亚硝酸盐也可以作为食品的防腐剂，在食品生产中的主要作用为，抑制微生物的生长，从而起到延长保证期的作用。

取其无色透明滤液进行比色测定。鉴于亚硝酸盐对人体具有较大的危害作用，我国针对食品生产中亚硝酸盐含量作出了一定的规定限制。声明：本文所用图片、文字来源《中国现代应用药学》2020年7月，版权归原作者所有

在体内的相关研究如沈晓等利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术结合精确相对分子质量和特征碎片离子对大鼠灌胃补阳还五汤后的脑组织中共检测到5个化合物，在血浆中检测到7个化合物，同时杨东辉等[10]利用高效液相色谱-二极管阵列检测器-线性离子阱质谱(HPLC-DADitrap/MS)结合化合物精确相对分子质量、特征碎片离子和紫外吸收特征在猪的血清中共鉴定了45个化合物，上述研究均为揭示补阳还五汤的药效物质基础提供了实验依据，但是其在临床上的相关研究尚未见文献报道，而药物只有进入人体后才能发挥药效，故对补阳还五汤在人体内的药物化学研究，更有益于阐释其药效物质基础。扫描范围选择m/z 100~1 500。纯度98%)对照品均购自上海源叶生物科技有限公司。2.2样本前处理分别取补阳还五汤、解冻后的血浆和尿液样本100L至EP管中，加入400L含0.1%甲酸甲醇溶液，涡旋震荡1 min，冰浴静置5 min，以15 000 rmin1、4℃下离心10 min，取300L上清液加LC-MS级水稀释至500L，使用含有0.22m滤膜的离心管中以10 000 rmin1、4℃下离心10 min，收集滤液，进样分析。

2方法2.1临床样本采集随机选取6名被诊断为脑卒中患者(男女各半)，禁食4 h，服用补阳还五汤后，分别在1，2 h采集患者的血浆和尿液样本，血浆和尿液离心(3 000 rmin1，10 min)，取上清液约0.5 mL，混合不同时间点的血浆和尿液样本后冷冻保存于80℃，备用。在尿液中鉴定了23个化合物。

流动相为水(A)-乙腈(B)(各含0.1%甲酸和5 mmolL1醋酸铵)。补阳还五汤严格遵照原方黄芪生120 g、当归尾6 g、赤芍415 g，地龙、川芎、桃仁、红花各3 g配比水煎而成。黄芪皂苷Ⅲ(批号：B20567。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：血浆，喹诺酮，赤芍，醋酸铵。

补阳还五汤常用于治疗脑血管意外后遗症中缺血性脑卒中。中药药效物质基础研究是阐释中药整体功效及作用本质的核心环节，目前对补阳还五汤和其在体内的药物化学的鉴定分析已有相关文献报道，如Liu等利用高效液相色谱-二极管阵列检测器-飞行时间质谱(HPLC-DAD-TOF/MS)技术结合化合物精确分子离子和特征碎片离子在补阳还五汤中一共鉴定了54个化合物，主要是喹诺酮类、黄酮类、异黄酮类、单萜苷类、皂苷类、有机酸和氨基酸。1仪器与材料Vanquish UHPLC超高效液相色谱仪、QE-HF-X型质谱仪、ST16R型冷冻离心机均来自美国Thermo公司。ESI源：毛细管电压为3.2 kV。

这些成分主要是黄酮类、苯酸类、苯酞类和皂苷类化合物。2.3对照品工作液配制精密称取适量的阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、黄芪皂苷Ⅲ和洋川芎内酯H对照品，置于10 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别配成质量浓度为10.0，10.0，20.0，10.0 mgmL1的储备液。

分别取各对照品储备液适量，置于同一个10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释配制对照品混合工作液，保存于20℃冰箱。结果在汤剂中共鉴定了55个化合物。

方法采集补阳还五汤及其临床患者口服给药后的血浆和尿液样本，样本经80%甲醇水处理后，采用Hyperil Gold C18色谱柱(1.0 mm50 mm，1.9m)，流动相为水(A)-乙腈(B)(各含0.1%甲酸和5 mmolL1醋酸铵)进行梯度洗脱，流速0.3 mLmin1，柱温40℃。目的应用超高效液相色谱串联四级杆轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术鉴定补阳还五汤及其在人血浆和尿液中药物化学成分。通过对比分析补阳还五汤、给药后人血浆和给药后人尿液样本，同时结合化合物的质谱碎裂规律，表征其制剂、含药血浆和尿液中药物化学成分。尿杯(上海高创化学科技有限公司)。补阳还五汤由黄芪生、当归尾、赤芍、地龙、川芎、红花、桃仁等7味常见中药组成，是益气活血的代表方[1]。纯度98%)对照品均购自上海士锋生物科技有限公司。

纯度98%)、洋川芎内酯H(批号：B21462。声明：本文所用图片、文字来源《中国现代应用药学》2020年7月，版权归原作者所有。

梯度洗脱：0~2 min，2%B，2~12 min，2%100%B，12~14 min，100%B，14~14.1 min，100%2%B，14.1~16 min，2%B。本研究采用的超高效液相色谱串联四级杆轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术具有快速、准确、灵敏度高的特点，建立此分析方法对补阳还五汤及其在人血浆和尿液药物化学成分进行快速分析，将为揭示其治疗缺血性脑卒中的物质基础提供更加有利的实验依据。

MS/MS二级扫描为数据依赖性扫描。补阳还五汤治疗缺血性脑卒中药效确切，但是其药效物质基础尚不明确。

2.5补阳还五汤化学成分和其在人血及尿液中药物化学成分的鉴定采用LC/MS条件对补阳还五汤样品和人血及尿液样品进行检测分析。结论本研究全面阐明了补阳还五汤及其在人血浆和尿液药物化学成分，为揭示补阳还五汤真正治疗脑卒中的药效物质基础提供了参考。通过比较补阳还五汤样品、给药组血浆和尿液的总离子流图和化合物质谱碎裂规律鉴定药物化学成分，并对主要成分采3结果3.1 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS色谱图的采集根据建立的测试分析方法，在正、负离子模式下采集补阳还五汤样品和给药人血浆及尿液样品的色谱图，结果见图1。流速为0.30 mLmin1。

纯度99%)、毛蕊异黄酮苷(批号：EB07531。血浆采血管(美国BD公司)。

2.4 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS分析色谱柱为Hyperil C18(1.0 mm50 mm，1.9m)。药理研究证明，补阳还五汤可以减少脊髓损伤部位的细胞凋亡[4]，促进脑缺血后血管生成，降低血管细胞黏附分子和基质金属蛋白酶-9的表达，降低C-反应蛋白和血脂水平，具有抗动脉粥样硬化作用等。

在给药后患者的血浆中共鉴定了34个化合物。甲醇、水、甲酸、醋酸铵(LC-MS级)均购自美国Thermo公司，其他试剂均为分析纯

通过比较补阳还五汤样品、给药组血浆和尿液的总离子流图和化合物质谱碎裂规律鉴定药物化学成分，并对主要成分采3结果3.1 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS色谱图的采集根据建立的测试分析方法，在正、负离子模式下采集补阳还五汤样品和给药人血浆及尿液样品的色谱图，结果见图1。梯度洗脱：0~2 min，2%B，2~12 min，2%100%B，12~14 min，100%B，14~14.1 min，100%2%B，14.1~16 min，2%B。纯度98%)对照品均购自上海士锋生物科技有限公司。纯度99%)、毛蕊异黄酮苷(批号：EB07531。

方法采集补阳还五汤及其临床患者口服给药后的血浆和尿液样本，样本经80%甲醇水处理后，采用Hyperil Gold C18色谱柱(1.0 mm50 mm，1.9m)，流动相为水(A)-乙腈(B)(各含0.1%甲酸和5 mmolL1醋酸铵)进行梯度洗脱，流速0.3 mLmin1，柱温40℃。黄芪皂苷Ⅲ(批号：B20567。

结果在汤剂中共鉴定了55个化合物。在给药后患者的血浆中共鉴定了34个化合物。

补阳还五汤常用于治疗脑血管意外后遗症中缺血性脑卒中。结论本研究全面阐明了补阳还五汤及其在人血浆和尿液药物化学成分，为揭示补阳还五汤真正治疗脑卒中的药效物质基础提供了参考。